ADAMTS14通过切割V型胶原维持基质稳定性，缺失后削弱YAP核转位与IPF成纤维细胞活化
核心概要
研究通过可成药基因组siRNA筛选发现ADAMTS14调控YAP核转位，在IPF患者肺组织的单细胞与空间转录组中定位到ADAMTS14阳性、CTHRC1高表达的肌成纤维细胞群并富集于成纤维细胞灶，在IPF患者来源肺成纤维细胞中敲低或敲除ADAMTS14后促纤维化基因、基质体基因与TGFβ反应下降，机制上鉴定V型胶原为ADAMTS14底物，其加工不足导致COL1:COL5比例由约50:1变为约20:1、基质不稳定、黏着斑紊乱、FAK-AKT信号与力传导减弱。
深度剖析
无偏siRNA筛选（7,638个siRNA池）将ADAMTS14鉴定为YAP核转位的调控因子，并在去卷积验证中确认其同时影响成纤维细胞TGFβ反应。 此前ADAMTS14主要与I型胶原成熟加工相关，本研究将其与YAP介导的机械活化联系起来。 高通量筛选加去卷积验证，阳性定义为转位评分≥21.5（FDR 1%）且在≥2条独立siRNA双链中成立，最终从230个验证命中中筛出23个优先靶点并选定ADAMTS14。
在IPF患者肺组织的单细胞与空间转录组中，ADAMTS14富集于CTHRC1高表达肌成纤维细胞，并定位于成纤维细胞灶等活跃纤维化区域，与ECM产生和基质硬度基因集相关。 把体外筛选结果落到人IPF组织的特定细胞亚群与空间位置上。 基于已发表scRNA-seq图谱（620,644细胞、49种细胞类型）与空间转录组数据（13例ILD、11例非ILD对照，约5万个Visium spot，30,988个手动注释），ADAMTS14阳性CTHRC1高表达肌成纤维细胞中COL1A1（log2FC 94.8）与COL1A2（log2FC 63.1）上调最显著，并富集YAP/TAZ、基质体与IPF特征基因集。
在5例IPF供体来源肺成纤维细胞中敲低ADAMTS14降低CYR61、CTGF、COL1A1及TGFβ诱导的ACTA2表达，并减弱TGFβ通路活性；在Scar-in-a-Jar模型中TGFβ刺激使对照胶原I与αSMA分别升高25倍和41倍，敲低后分别降低77%和78%。 显示ADAMTS14的胶原加工功能直接决定成纤维细胞对TGFβ的敏感性，而非仅通过非胶原途径调节TGFβ生物利用度。 5例IPF供体siRNA敲低加qPCR与bulk RNA-seq（DESeq2，20,095基因多重校正），另有5例供体的巨分子拥挤实验，统计采用双因素方差分析与Tukey/Dunnett校正。
共免疫沉淀质谱将V型胶原（COL5A1、COL5A2）鉴定为ADAMTS14主要富集底物，ADAMTS14缺失时V型胶原特异性切割位点（COL5A1的PANQ(438).(439)DTIY与COL5A2的GPPG(906).(907)ATGF）切割减少、未成熟V型胶原累积，COL1:COL5比例由约50:1变为约20:1，伴随黏着斑增多而紊乱、FAK与AKT1磷酸化下降、细胞形态变圆、durotaxis能力约降低50%。 提出ADAMTS14–V型胶原–黏着斑轴这一前馈环路，把细胞外蛋白水解重塑与黏着斑动力学及YAP机械活化连接起来。 coIP-MS（4个样本、2次独立实验）加CDM蛋白质组学（4,208个蛋白命中，其中208个基质体蛋白，PCA解释82%方差）与Brillouin显微镜、SHG双光子、凝胶收缩、durotaxis等功能实验相互印证。
启示与展望
该结果适用于人IPF来源肺成纤维细胞及患者肺组织样本，为以ADAMTS14为靶点、部分而非完全抑制YAP活化的抗纤维化策略提供机制依据；对关注基质-细胞机械耦合、黏着斑信号或胶原翻译后加工的研究者，可作为机制框架与候选靶点参考。
作者指出尚未证明ADAMTS14是否存在独立于YAP的促纤维化效应，也未直接检验其对YAP旁系同源物TAZ的作用；小鼠中ADAMTS14与ADAMTS2存在功能冗余，因此ADAMTS14缺失小鼠在肺纤维化模型中未见明显表型，提示物种差异或代偿机制；此外，COL1:COL5比例改变导致基质力学性质下降的推断主要基于既有文献而非本研究直接测定。